鱼病知识--细菌的现代鉴定技术


细菌的鉴定,主要有常规细菌学检测和现代鉴定技术两方面。
其中,常规细菌学检测包括形态特征,培养特性已经生理生化特征的检测。细菌的生理生化试验是细菌鉴定中经典且实用的方法,主要包括碳水化合物的代谢试验,蛋白质及氨基酸的代谢试验,碳源和氮源利用试验,酶类及其他试验等几个方面。

  现代鉴定技术,主要有API鉴定系统,VITEK系统和Biology(MicroStation)自动微生物鉴定技术等三大系统。本文将对这三大系统进行一个简单的介绍。

API鉴定技术
原理:API鉴定系统的主要部分是API试剂条及检索工具,试验是由20个含干燥底物的小管所组成,这些小管用细菌悬浮液接种,培养一段时间后,通过细菌的代谢作用,管内培养物产生颜色的变化,然后根据说明表判读反应,并参照分析图索引或APILAB PLUS软件得到鉴定结果。


在API鉴定系统中有15个鉴定系列,20余个品种,分别应用于不同的细菌。
  结果观察:各类API试剂条均由多个生化反应组成,将生化反应谱转化成数码,使用生化反应检索手册或API电脑分析软件进行检索,确定生化反应谱对应的是什么细菌。

VITEK系统
  原理:VITEK自动化微生物分析仪由填充机,封口机,读取器,恒温器,电脑主机及打印机组成,充填机,封口机3min内把样本注入试验卡中及封口,读取器,恒温箱自动恒定温度并同时读取卡内生化反应变化,电脑主机负责分析资料的储存,系统操作及分析程式的运作。


仪器把30个对细菌鉴定必需的生化反应培养基固定到卡片上,然后通过培养后仪器对显色反应进行判断,利用数值法进行判定。根据需要鉴定的微生物种类的不同,设计了不同的鉴定卡片,比如革兰氏阴性菌卡,革兰氏阳性菌卡,酵母菌卡等。VITEK鉴定系统还可以利用其专用药敏卡,在菌株鉴定的同时检测药物敏感性。

Biology(MicroStation)自动微生物鉴定技术
原理:通过在一块鉴定板上使用95种碳源进行试验,微生物利用碳源进行呼吸时,会将四唑类氧化还原染色剂,从无色还原成紫色,从而在微生物的鉴定板上形成该生物特征性的反应模式或“指纹”,通过读数仪来读取颜色变化。


由于对光密度的吸收值的差异,计算机通过概率最大模拟法,将该反应模式或“指纹”与数据库相比较,将目标微生物与数据库的相关菌的特征数据进行比对,对分析的微生物进行最大限度的匹配,可以瞬间得到鉴定结果,确定所分析的微生物的属名或种名。